自體CAR-T細(xì)胞療法在血液腫瘤治療中取得了革命性成功，但其制備工藝復(fù)雜，時間周期長，治療成本高，還有細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）等副作用風(fēng)險，高度個性化，嚴(yán)重制約了可及性和實際應(yīng)用。體內(nèi)CAR-T細(xì)胞療法則有望成為一種替代方案克服上述挑戰(zhàn)，其利用可以規(guī)模化生產(chǎn)的靶向遞送系統(tǒng)將編碼CAR的遺傳物質(zhì)導(dǎo)入內(nèi)源T細(xì)胞，直接在患者體內(nèi)生成CAR-T細(xì)胞，省去了體外細(xì)胞處理、運輸和基于化療的清淋預(yù)處理。

☆ 攜帶整合型載荷的工程化病毒載體，最主要是慢病毒，通過工程化改造病毒包膜蛋白展示識別T細(xì)胞特異性表面標(biāo)志物的高親和力結(jié)合劑，同時消除載體與細(xì)胞表面天然受體的互作，實現(xiàn)對患者T細(xì)胞的高度選擇性基因轉(zhuǎn)移。這類平臺可使T細(xì)胞根據(jù)抗原的存在和負(fù)荷，自行調(diào)節(jié)其擴增和持續(xù)存在，在需要較高藥效的適應(yīng)癥中可能具有優(yōu)勢。

☆ 攜帶瞬時表達RNA的脂質(zhì)納米顆粒（LNP）,主要通過抗體功能化實現(xiàn)T細(xì)胞工程化和細(xì)胞靶向，高生物降解性和低反應(yīng)原型的可電離脂質(zhì)則適合于重復(fù)給藥。這類平臺可以通過調(diào)整給藥方案，相對獨立于抗原負(fù)荷來控制暴露，在安全性要求更高的適應(yīng)癥中可能具有優(yōu)勢。

在體內(nèi)遞送中，抗體的特異性、純度和功能性至關(guān)重要，任何微小的偏差都可能導(dǎo)致脫靶效應(yīng)或激活異常免疫反應(yīng)，來自Bio X Cell的高品質(zhì)抗體已助力多項體內(nèi)CAR-T的LNP遞送研究。如需購買美國Bio X Cell公司產(chǎn)品，請聯(lián)系Bio X Cell授權(quán)代理商兼中國現(xiàn)貨庫存中心——欣博盛生物。

Bio X Cell抗體LNP遞送研究案例

長效體內(nèi)CAR-T結(jié)合IL-6有效沉默

2022年，華東師范大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院俞磊與閆志強聯(lián)合團隊發(fā)表研究，構(gòu)建同時包含CD19-CAR與IL-6 shRNA編碼基因的質(zhì)粒，并將其封裝入LNP，并修飾以Bio X Cell的人CD3抗體（#BE0001-1）作為靶向配體，形成AntiCD3-LNP/CAR19+shIL6。

在注射白血病小鼠后，AntiCD3-LNP顯著富集于淋巴結(jié)/脾臟等淋巴組織，且能穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體內(nèi)的T細(xì)胞，將其轉(zhuǎn)化為IL-6低分泌型的CAR-T細(xì)胞。質(zhì)粒DNA載荷實現(xiàn)了長達90天的穩(wěn)定CAR表達，顯著延長白血病小鼠的生存，表現(xiàn)出與傳統(tǒng)CAR-T相當(dāng)?shù)目鼓[瘤效果，同時有效沉默IL-6減少CRS發(fā)生。

2023年底，賓夕法尼亞大學(xué)Michael J. Mitchell教授團隊發(fā)表研究，成功開發(fā)了一種靶向T細(xì)胞的工程化抗體-LNP（Ab-LNP），將針對不同泛T細(xì)胞標(biāo)志物（CD3、CD5、CD7）的抗體片段連接到 LNP 表面，比較了不同抗體片段的遞送效率、生物分布與功能學(xué)結(jié)果。裝載 CD19 CAR mRNA后，治療組出現(xiàn)了劑量依賴的 CAR 表達、短期的細(xì)胞因子升高以及對 B 細(xì)胞高達 ~90% 的清除，CD3-LNP 在不同劑量下表現(xiàn)出最-強的遞送。

其中 Bio X Cell 提供的小鼠 CD3?抗體為F(ab)? 形式，省去了酶解切割步驟，直接進行還原處理即可獲取與LNP 結(jié)合的片段，為研究提供了極大的便利。