作為整個(gè)ELISA實(shí)驗(yàn)的最后一步，檢測(cè)結(jié)果的計(jì)算對(duì)于整個(gè)實(shí)驗(yàn)十分重要。欣博盛生物為您整理了ELISA數(shù)據(jù)處理相關(guān)的知識(shí)，希望對(duì)您的科研有所幫助！

ELISA結(jié)果處理流程

以?shī)A心法ELISA的數(shù)據(jù)處理為例：

1. ELISA的樣本通常要設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行檢測(cè)，這樣才能為結(jié)果的統(tǒng)計(jì)驗(yàn)證提供足夠的數(shù)據(jù)。分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)組樣本的吸光度的平均值。復(fù)孔檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)（CV）不應(yīng)超出20%。

2. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)、OD值作縱坐標(biāo)，擬合曲線。（各類(lèi)ELISA處理軟件與Excel均可提供曲線擬合選項(xiàng)。）下圖展示了一條具有代表性的標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)來(lái)自QuantiCyto® Human MIF ELISA kit(EHC086).

注：本圖僅供參考，應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算標(biāo)本中人MIF的含量。

3. 根據(jù)擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)待測(cè)樣品的OD值計(jì)算出樣本的濃度。若樣品經(jīng)過(guò)稀釋?zhuān)毘艘韵鄳?yīng)的稀釋倍數(shù)。

4. 對(duì)于OD值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍外的樣品，為獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，需排查可能存在的問(wèn)題。

ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方法

選擇正確的曲線擬合方法對(duì)于獲取準(zhǔn)確的ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。面對(duì)眾多的擬合選項(xiàng)，研究人員需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體情況和標(biāo)準(zhǔn)曲線的特性來(lái)挑選最合適的模型。

以下為幾種常見(jiàn)的ELISA擬合方式：

1. 線性回歸

線性回歸適用于分析在較小濃度范圍內(nèi)數(shù)據(jù)點(diǎn)與濃度之間呈現(xiàn)線性關(guān)系的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。它通過(guò)最小二乘法找到最佳擬合直線。在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）數(shù)據(jù)分析中，當(dāng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的線性關(guān)系非常顯著時(shí)，線性回歸通常能夠提供較高的R2值，R2值是衡量模型擬合優(yōu)度的一個(gè)指標(biāo)，其值越接近1，表示模型擬合效果越好。如果數(shù)據(jù)的線性擬合效果不佳，可能需要考慮使用其他類(lèi)型的曲線擬合方法，例如二次曲線或logistic曲線（四參數(shù)模型），這些方法適用于數(shù)據(jù)點(diǎn)與濃度之間存在非線性關(guān)系的場(chǎng)合。

Linear Fit:：

2. 二次多項(xiàng)式回歸

在ELISA數(shù)據(jù)處理中，二次多項(xiàng)式回歸是處理非線性數(shù)據(jù)的有效方法，特別適用于那些在特定濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)輕微彎曲的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在許多ELISA實(shí)驗(yàn)中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合近似于二次多項(xiàng)式的升段或者降段。因此，使用二次多項(xiàng)式回歸時(shí)，應(yīng)確保所選的取值范圍能夠準(zhǔn)確地反映這些曲線段的特性。

Quadratic Fit:  

3. 四參數(shù)對(duì)數(shù)曲線擬合

四參數(shù)對(duì)數(shù)曲線擬合適用于大多數(shù)ELISA實(shí)驗(yàn)，能夠很好地描述S形標(biāo)準(zhǔn)曲線。它要求X值不能小于0（因?yàn)橹笖?shù)函數(shù)的底數(shù)必須是正實(shí)數(shù)）。四參數(shù)對(duì)數(shù)曲線擬合在很多情況下都能很好地?cái)M合ELISA的反應(yīng)曲線，這使得它成為ELISA數(shù)據(jù)分析中應(yīng)用最-廣的模型之一。

Logistic Model: 

ELISA 數(shù)據(jù)處理軟件使用（ELISA Calc為例）

ELISA Calc是一款專(zhuān)門(mén)用于處理ELISA數(shù)據(jù)的軟件。它支持多種回歸和擬合模型，如直線回歸、二次曲線回歸以及Logistic曲線擬合等 。您可以通過(guò)輸入標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和對(duì)應(yīng)的吸光度來(lái)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并據(jù)此計(jì)算樣品的濃度。欣博盛生物在此給各位老師展示使用ELISA Calc軟件的完整步驟：

1. 獲取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)的初步處理（此處僅包含標(biāo)曲數(shù)據(jù)）：

本次實(shí)驗(yàn)做復(fù)孔，如實(shí)驗(yàn)作復(fù)孔、三孔，需要先進(jìn)行平均值計(jì)算（如表中標(biāo)紅部分）。

注：本次實(shí)驗(yàn)中所用試劑盒為QuantiCyto® Mouse TNF-α ELISA kit(EMC102a)，試劑盒具體參數(shù)信息如下：

2. 軟件下載

此處數(shù)據(jù)處理軟件為ELISA Calc，可在網(wǎng)絡(luò)上自行免費(fèi)下載。

3. 輸入OD值與標(biāo)準(zhǔn)品濃度

（1）打開(kāi)ELISA Calc軟件后，界面如下所示：

（2）在表格區(qū)域依次輸入或點(diǎn)擊左下方“粘貼(P)"直接粘貼標(biāo)準(zhǔn)曲線的數(shù)據(jù)。在X(濃度/劑量)這一列表格中輸入標(biāo)準(zhǔn)品濃度，在Y（反應(yīng)值）列依次輸入X列濃度所對(duì)應(yīng)的OD值；

4. 選擇擬合曲線的類(lèi)型并進(jìn)行計(jì)算

（1）線性回歸

Linear Fit:：

以線性回歸為例，點(diǎn)擊左上角“回歸、擬合模型(M)"選擇“直線回歸"，選擇是否扣除本底，完成后點(diǎn)擊 “回歸、擬合(R)"按鈕，自動(dòng)生成擬合曲線。

點(diǎn)擊后，ELISA Calc展示界面如下：

（2）二次多項(xiàng)式回歸

Quadratic Fit:  

點(diǎn)擊左上角“回歸、擬合模型(M)"選擇“二次曲線回歸"，選擇是否扣除本底，完成設(shè)置后點(diǎn)擊 “回歸、擬合(R)"按鈕，自動(dòng)生成擬合曲線。

（3）四參數(shù)對(duì)數(shù)曲線擬合

Logistic Model: 

點(diǎn)擊左上角“回歸、擬合模型(M)"選擇“l(fā)ogistic曲線擬合2（四參數(shù)）"，選擇是否扣除本底，完成設(shè)置后點(diǎn)擊 “回歸、擬合(R)"按鈕，自動(dòng)生成擬合曲線。

5. 查看標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合后的信息

點(diǎn)擊“回歸方程(R)"按鈕后，您將查看到右側(cè)展示的回歸分析結(jié)果。在這些結(jié)果中，R2值用于衡量模型對(duì)數(shù)據(jù)的擬合程度。理想情況下，R2值越接近1，表示模型對(duì)數(shù)據(jù)的解釋能力越強(qiáng)，擬合效果越好。如果觀察到R2值沒(méi)有達(dá)到預(yù)期的理想水平，這可能意味著當(dāng)前的回歸模型沒(méi)有很好地捕捉到數(shù)據(jù)之間的關(guān)系，或者數(shù)據(jù)本身存在較大的變異性，可以通過(guò)檢查數(shù)據(jù)是否輸入有誤、去除異常數(shù)值、選擇其他擬合方式等方法進(jìn)行排查或修正。

6. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度

點(diǎn)擊“由Y計(jì)算X"，在“Y值"框內(nèi)輸入實(shí)驗(yàn)所得OD值，點(diǎn)擊“計(jì)算"，即可計(jì)算出對(duì)應(yīng)的X值（濃度值）；當(dāng)然，ELISA Calc支持批量計(jì)算，可從Eecel或者word文檔中拷貝一批Y值（OD值），點(diǎn)擊左下角的“粘貼"按鈕進(jìn)行批量計(jì)算。軟件會(huì)自動(dòng)處理這些數(shù)據(jù)，并在輸出區(qū)域展示每個(gè)OD值對(duì)應(yīng)的濃度。

以上為ELISA 數(shù)據(jù)處理軟件使用（ELISA Calc為例）的流程簡(jiǎn)介，該軟件操作簡(jiǎn)單，極易上手，可以結(jié)合excel表格處理數(shù)據(jù)，在計(jì)算大批量數(shù)據(jù)時(shí)表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)。

關(guān)于欣博盛生物：

欣博盛生物科技有限公司成立于2007年，是一家力耕于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高新技術(shù)企業(yè)，專(zhuān)門(mén)從事以ELISA產(chǎn)品為主的生物試劑研發(fā)與銷(xiāo)售，致力于為廣大研究人員提供高品質(zhì)的科研產(chǎn)品。

欣博盛研發(fā)生產(chǎn)中心擁有完整的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒研發(fā)和生產(chǎn)平臺(tái)，研發(fā)生產(chǎn)團(tuán)隊(duì)由具有近30年免疫檢測(cè)行業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專(zhuān)家?guī)ьI(lǐng)，由具有生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、檢驗(yàn)學(xué)等相關(guān)專(zhuān)業(yè)和研發(fā)經(jīng)驗(yàn)的人員組成。廣泛與歐美知-名的抗原抗體生產(chǎn)公司和機(jī)構(gòu)開(kāi)展合作，篩選和委托定制高質(zhì)量的原料，采用行業(yè)內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)來(lái)研發(fā)生產(chǎn)ELISA試劑盒。公司自主研發(fā)的ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員的好評(píng)。欣博盛品牌 ELISA試劑盒自推出以來(lái)已先后在Nature, Cell, PNAS等國(guó)際期刊中被引用。

欣博盛生物現(xiàn)可提供三百余種不同指標(biāo)ELISA試劑盒，涵蓋各類(lèi)常用指標(biāo)，更可提供ELISA定制與代測(cè)服務(wù)。更多詳情，歡迎咨詢欣博盛生物！