?背景有黑點，怎么辦？?詳情信息

C.改變緩沖液，如換為BSA。

使用現(xiàn)配的溶液（Running/transfer/blocking/wash buffers）或商業(yè)化溶液減少因長菌長霉造成的黑點。

3、封閉液及抗體交互作用

降低蛋白上樣量，通常蛋白上樣量為30-50ug，但有些蛋白表達量較高（如β-actin），此時可依蛋白表達量，進行微調(diào)。

C.于4℃過夜孵育，減少抗體非特異性結合。

D.全細胞或亞細胞萃取，使用商業(yè)化全細胞或亞細胞萃取試劑盒提取蛋白樣品，減少配制試劑溶液以及操作中分離不干凈的問題。

B.蛋白變性不完-全，也會使條帶成團拖曳；此時，可通過延長樣品加熱時間(一般約5分鐘)及調(diào)整SDS(一般是2 %)比例，使蛋白變性更完-全。

B.空的泳道加Sample Buffer

避免膠體過熱。電壓過高也會出現(xiàn)微笑、歪斜條帶等條帶，建議上層濃縮膠使用80V；下層分離膠使用100-120V。另外也需檢查電泳槽是否有銹蝕造成電流不穩(wěn)。過熱時可改為在冷室或者冰浴中進行電泳。

C.封閉時間增加，一般情況會使用室溫37度封閉1小時，可視情況調(diào)整封閉的條件。

C.膜沒有完-全均勻濕透，PVDF膜較會出現(xiàn)這個狀況，使用PVDF膜前，需用100% methanol完-全浸潤膜。

C.足夠的洗脫時間和次數(shù)

C.避免反復凍融樣品（建議分裝）；建議使用新鮮制備的樣品。

2、蛋白形成多聚體

B.樣本煮沸溫度達到95℃-100℃。

查詢生物信息是否有后修飾、剪切體等。

B.減少上樣量。

B.設對照組來確認抗體非專一性結合可能的原因，例如：是否有目標蛋白表達。